細(xì)胞培養(yǎng)中的注意事項(xiàng)
1 冷凍管應(yīng)如何解凍？
取出冷凍管后，須立即放入37 C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過(guò)冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí)，必須注意安全，預(yù)防冷凍管之爆裂。
 
2 細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí)，是否應(yīng)馬上去除DMSO？
除少數(shù)特別注明對(duì)DMSO敏感之細(xì)胞外，jue大部分細(xì)胞株（包括懸浮性細(xì)胞），在解凍之后，應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可，如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)或貼附之問(wèn)題。
 
3 可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基？
不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基，細(xì)胞大都無(wú)法立即適應(yīng)，造成細(xì)胞無(wú)法存活。
 
4 可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類(lèi)？
不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源，所以血清的種類(lèi)和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響。來(lái)自不同物種的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無(wú)法存活。
 
5 何謂FBS, FCS, CS, HS ?
FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思，兩者都是指胎牛血清， FCS乃錯(cuò)誤的使用字眼，請(qǐng)不要再使用。CS (calf serum) 則是指小牛血清。HS (horseserum) 則是指馬血清。
 
6 培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用5 %或10% CO2？或根本沒(méi)有影響？
一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作為pH 的緩沖系統(tǒng)，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用的CO2濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 含量為每公升3.7 g時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用10% CO2；當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5 g時(shí)，則應(yīng)使用5% CO2培養(yǎng)細(xì)胞。
 
7 何時(shí)須更換培養(yǎng)基？
視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定，或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時(shí)間，按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。
 
8 培養(yǎng)基中是否須添加抗生素？
除于特殊篩選系統(tǒng)中外，一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下，培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何抗生素。
 
9 附著性細(xì)胞繼代時(shí)所使用之trypsin-EDTA濃度？應(yīng)如何處理？
一般使用之trypsin-EDTA 濃度為0.05% trypsin-0.53m MEDTA.4 Na。**次開(kāi)瓶后應(yīng)立即少量分裝于無(wú)菌試管中，保存于–20 C，避免反復(fù)冷凍解凍造成trypsin之活性降低，并可減少污染之機(jī)會(huì)。
 
10 懸浮性細(xì)胞應(yīng)如何繼代處理？
一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中，稀釋細(xì)胞濃度即可，若培養(yǎng)液太多時(shí)，可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高，直到無(wú)法容納為止。分瓶時(shí)取出一部份含細(xì)胞之培養(yǎng)液**另一新的培養(yǎng)角瓶，加入新鮮培養(yǎng)基稀釋**適當(dāng)濃度，重復(fù)前述步驟即可。
 
11 欲將一般動(dòng)物細(xì)胞離心下來(lái)，其離心速率應(yīng)為多少轉(zhuǎn)速？
欲回收動(dòng)物細(xì)胞，其離心速率一般為300xg (約1,000rpm)，5 - 10分鐘，過(guò)高之轉(zhuǎn)速，將造成細(xì)胞死亡。
 
12 細(xì)胞之接種密度為何？
依照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之接種密度或稀釋分盤(pán)之比例接種即可。細(xì)胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)之一重要原因。
 
13 細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基之成份為何？
動(dòng)物細(xì)胞冷凍保存時(shí)**常使用的冷凍培養(yǎng)基是含5 - 10% DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95 %原來(lái)細(xì)胞生長(zhǎng)用之新鮮培養(yǎng)基均勻混合之。注意：由于DMSO 稀釋時(shí)會(huì)放出大量熱能，故不可將DMSO直接加入細(xì)胞液中，必須使用前先行配制完成。
 
14 DMSO之等級(jí)和無(wú)菌過(guò)濾之方式為何？
冷凍保存使用之DMSO等級(jí)，必須為T(mén)issue culture grade之DMSO (如Sigma D2650)，其本身即為無(wú)菌狀況，**次開(kāi)瓶后應(yīng)立即少量分裝于無(wú)菌試管中，保存于4 C，避免反復(fù)冷凍解凍造成DMSO之裂解而釋出有害物質(zhì)，并可減少污染之機(jī)會(huì)。若要過(guò)濾DMSO，則須使用耐DMSO之Nylon材質(zhì)濾膜。
 
15 冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一：冷凍管置于4 C 30~60分鐘 → (-20 C 30分鐘) → -80 C 16~18小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 C **–80 C 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 C 不可超過(guò)1小時(shí)，以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80 C 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
 
16 細(xì)胞欲冷凍保存時(shí)，細(xì)胞冷凍管內(nèi)應(yīng)有多少細(xì)胞濃度？
冷凍管內(nèi)細(xì)胞數(shù)目一般為1x106 cells/ml vial，融合瘤細(xì)胞則以5x106 cells/ml vial 為宜。
 
17 應(yīng)如何避免細(xì)胞污染？
細(xì)胞污染的種類(lèi)可分成細(xì)菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉?jié){菌。主要的污染原因?yàn)闊o(wú)菌操作技術(shù)不當(dāng)、操作室環(huán)境不佳、污染之血清和污染之細(xì)胞等。嚴(yán)格無(wú)菌操作技術(shù)、清潔的環(huán)境、與品質(zhì)良好之細(xì)胞來(lái)源和培養(yǎng)基配制是減低污染之**好方法。
 
18 如果細(xì)胞發(fā)生微生物污染時(shí)，應(yīng)如何處理？
加入相應(yīng)抗生素，直接滅菌后丟棄之。
 
19 支原體(mycoplasma) 污染的細(xì)胞， 是否能以肉眼觀(guān)察出異狀？
不能。除極有經(jīng)驗(yàn)之**外，大多數(shù)遭受支原體污染的細(xì)胞株，無(wú)法以其外觀(guān)分辨之。
 
20 支原體污染會(huì)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)有何影響？
支原體污染幾乎可影響所有細(xì)胞之生長(zhǎng)參數(shù)，代謝及研究任一數(shù)據(jù)。故進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前，必須確認(rèn)細(xì)胞為mycoplasma-free，實(shí)驗(yàn)結(jié)果之?dāng)?shù)據(jù)方有意義。#p#分頁(yè)標(biāo)題#e#
 
21 偵測(cè)出細(xì)胞株有支原體污染時(shí)， 該如何處理？
直接滅菌后丟棄，以避免污染其它細(xì)胞株。
 
22 CO2培養(yǎng)箱之水盤(pán)如何保持清潔？
定期(**少每?jī)芍芤淮? 以無(wú)菌蒸餾水或無(wú)菌去離子水更換之。
 
23 為何培養(yǎng)基保存于4 C 冰箱中，顏色會(huì)偏暗紅色，且pH值會(huì)越來(lái)越偏堿性？
培養(yǎng)基保存于4 C 冰箱中，培養(yǎng)基內(nèi)之CO2會(huì)逐漸溢出，造成培養(yǎng)基越來(lái)越偏堿性，而培養(yǎng)基中之酸堿指示劑(通常為phenol red) 的顏色也會(huì)隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿之結(jié)果， 將造成細(xì)胞生長(zhǎng)停滯或死亡。若培養(yǎng)基偏堿時(shí)，可以通入無(wú)菌過(guò)濾之CO2，以調(diào)整pH 值。
 
24 各種細(xì)胞培養(yǎng)用的dish，flask是否均相同？
不同廠(chǎng)牌的dish或flask，其所coating的polymer不同，制造程序亦不同，雖對(duì)大部分細(xì)胞沒(méi)有太大之影響，惟少數(shù)細(xì)胞則可能因使用廠(chǎng)牌不同之dish或flask而有顯著之生長(zhǎng)差異。
 
25 購(gòu)買(mǎi)之細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后，為何會(huì)發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形？
研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少，大都是因?yàn)殡x心過(guò)程操作上的失誤，造成細(xì)胞的物理性損傷，以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心，應(yīng)待細(xì)胞生長(zhǎng)隔夜后再更換培養(yǎng)基即可。
 
26 購(gòu)買(mǎi)之細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因？
研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳，常見(jiàn)原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過(guò)程錯(cuò)誤。冷凍細(xì)胞解凍后，加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤。細(xì)胞置于–80 C太久。
 
27 收到之冷凍管瓶身破裂，瓶蓋有裂紋，或瓶蓋脫落之原因？
冷凍管瓶蓋裂紋，或瓶身破裂，可能是因?yàn)椴僮髡邐A取冷凍管時(shí)用力不當(dāng)，造成冷凍管裂損，建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動(dòng)或松脫，乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象，冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染，故冷凍管于放入和取出液氮桶時(shí)，均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。
 
28 如何選用特殊細(xì)胞系培養(yǎng)基？
培養(yǎng)某一類(lèi)型細(xì)胞沒(méi)有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長(zhǎng)?？傊?*MEM做粘附細(xì)胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)是一個(gè)好的開(kāi)始，各種目的無(wú)血清培養(yǎng)**好**AIM V（12005）培養(yǎng)基（SFM）。
 
29 L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎？它在溶液中不穩(wěn)定嗎？
L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)是重要的。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來(lái)源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后會(huì)降解，但是確切的降解率一直沒(méi)有**終定論。L-谷氨酰胺的降解導(dǎo)致氨的形成，而氨對(duì)于一些細(xì)胞具有毒性。
 
30 GlutaMAX-I是什么？培養(yǎng)細(xì)胞如何利用GlutaMAX-I？這個(gè)二肽有多穩(wěn)定？
GlutaMAX-I 二肽是一個(gè)L-谷氨酰胺的衍生物，其不穩(wěn)定的alpha-氨基用L-丙氨酸來(lái)保護(hù)。一種肽酶逐漸裂解二肽，釋放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常穩(wěn)定，即使在121磅滅菌20分鐘，GlutaMAX-I 二肽溶液有**小的降解，如果在相同條件下，L-谷氨酰胺幾乎完全降解。
 
31 什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅？
酚紅在培養(yǎng)基中被用來(lái)作為PH值的指示劑：中性時(shí)為紅色，酸性時(shí)為黃色，堿性時(shí)為紫色。研究表明，酚紅可以模擬固醇類(lèi)激素的作用，（特別是雌激素）。為避免固醇類(lèi)反應(yīng)，培養(yǎng)細(xì)胞，尤其是哺乳類(lèi)細(xì)胞時(shí)，用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測(cè)，一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測(cè)時(shí)，不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。
 
32 培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么？
丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源，盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是，如果沒(méi)有葡萄糖的話(huà)，細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉。
 
33 目錄上說(shuō)，Hank’s 平衡鹽溶液(HBS)要在空氣中使用，不需要CO2培養(yǎng)箱。原因是什么？Hank’s 平衡鹽溶液(HBS)和Earle’s平衡鹽溶液(EBS)有什么本質(zhì)的功能差別？
HBS和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平，在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡，以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2 中，溶液會(huì)變堿，Hanks液在CO2培養(yǎng)箱中會(huì)變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織，需要用Eagles液，。如果僅僅是清洗將要在細(xì)胞培養(yǎng)基中儲(chǔ)存的組織，用Hanks液就可以了。
 
34 二價(jià)離子抑制胰蛋白酶活性嗎？使用胰蛋白酶時(shí)加入EDTA的目的是什么？
二價(jià)離子的確抑制胰蛋白酶活性。EDTA用來(lái)螯合游離的鎂離子和鈣離子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細(xì)胞前，用EDTA清洗細(xì)胞，以消除來(lái)自培養(yǎng)基中所有的二價(jià)離子。
 
35 當(dāng)在無(wú)血清培養(yǎng)基中添加抗生素時(shí)，降低**少在有血清培養(yǎng)基中所使用濃度的50%。血清蛋白會(huì)結(jié)合和滅活一些抗生素。在無(wú)血清培養(yǎng)條件下，抗生素不被滅活，可能對(duì)于細(xì)胞達(dá)到毒性水平。
 
36 一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時(shí)，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因?yàn)橐恍┛股睾脱逯械幕境煞衷诮鈨龊缶烷_(kāi)始降解。
 
37 大部分添加物和試劑**多可以?xún)鋈?次，如果次數(shù)更多都會(huì)在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀，將會(huì)影響它的性能。#p#分頁(yè)標(biāo)題#e#
 
38 在溶解的一周內(nèi)使用貯存在4℃冰箱中的液體胰蛋白酶溶液。胰蛋白酶在4℃就可能開(kāi)始降解，如果在室溫下放置超過(guò)30分鐘，就會(huì)變得不穩(wěn)定。
 
 
細(xì)胞培養(yǎng)常見(jiàn)問(wèn)題的原因及對(duì)策：
1. 培養(yǎng)液pH值變化太快：
CO2張力不對(duì)。培養(yǎng)瓶蓋擰得太緊。NaHCO3緩沖系統(tǒng)緩沖力不足。培養(yǎng)液中鹽濃度不正確。細(xì)菌、酵母或真菌污染。
按培養(yǎng)液中NaHCO3濃度增加或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度，2.0g/L到3.7g/L濃度NaHCO3對(duì)應(yīng)CO2濃度為5％到10％。（2）改用不依賴(lài)CO2培養(yǎng)液。
松開(kāi)瓶蓋1/4圈。
加HEPES緩沖液**10到25mM終濃度。
在CO2培養(yǎng)環(huán)境中改用基于Earle’s鹽配制的培養(yǎng)液，在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)改用Hank’s鹽配制的培養(yǎng)液。
丟棄培養(yǎng)物或用抗生素除菌。
 
2. 培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀，但pH值不變：
用洗滌劑清洗后殘留磷酸鹽將培養(yǎng)基成分沉淀下來(lái)。冰凍保存培養(yǎng)液。
用去離子水反復(fù)沖洗玻璃器皿，然后除菌。
將培養(yǎng)液加熱到37℃，搖動(dòng)使其溶解如沉淀仍然存在，丟棄培養(yǎng)液。
 
3. 培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀，同時(shí)pH 發(fā)生變化：
細(xì)菌或真菌污染。
丟棄培養(yǎng)物或用抗生素除菌。
 
4. 培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁：
胰蛋白酶消化過(guò)度；支原體污染；培養(yǎng)液中無(wú)貼壁因子。
縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度。
分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。
 
5. 懸浮細(xì)胞成簇：
培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子。支原體污染。蛋白酶過(guò)度消化使得細(xì)胞裂解釋放DNA。
用無(wú)鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞，輕輕吹吸細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液。
分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。
用DNase I處理細(xì)胞。
 
6. 原代細(xì)胞培養(yǎng)物污染：
原代培養(yǎng)組織在進(jìn)入培養(yǎng)前已污染
培養(yǎng)前用含高濃度抗生素的平衡鹽溶液反復(fù)沖洗組織。
 
7. 培養(yǎng)細(xì)胞死亡：
培養(yǎng)箱內(nèi)無(wú)CO2。培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動(dòng)太大。細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過(guò)程中損傷。培養(yǎng)液滲透壓不正確。培養(yǎng)液種有毒代謝產(chǎn)物堆積。
檢測(cè)培養(yǎng)箱內(nèi)CO2
檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度
取新的保存細(xì)胞種
檢測(cè)培養(yǎng)液滲透壓。注意：大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞能耐受滲透壓為260–350mOsm/kg。加入額外試劑如HEPES或藥物都有可能影響培養(yǎng)液滲透壓。
換入新鮮培養(yǎng)液
 
8. 培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)減慢：
由于更換不同培養(yǎng)液或血清。培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長(zhǎng)必需成分如谷氨酰胺或生長(zhǎng)因子耗盡或缺乏或已被破壞。培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染。試劑保存不當(dāng)。
比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)。
增加起始培養(yǎng)細(xì)胞濃度。
讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液。
換入新鮮配制培養(yǎng)液。
補(bǔ)加谷氨酰胺或生長(zhǎng)因子。
用無(wú)抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物?；蛴每股爻?。
血清需保存在-5℃ 到-20℃。培養(yǎng)液需在2–8℃避光保存。含血清完全培養(yǎng)液在2–8℃保存，并在2周內(nèi)用完。
接種細(xì)胞起始濃度太低，細(xì)胞已老化，支原體污染。
增加接種細(xì)胞起始濃度。
換用新的保種細(xì)胞。
分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。
 
血清
1. 保存血清**好的方法?
建議血清應(yīng)保存在-5℃**-2O℃。然而，若存放于4℃時(shí)，請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。若您一次無(wú)法用完一瓶，建議您無(wú)菌分裝血清**恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。
 
2. 如何解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
建議您將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。
 
3. 血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理?
血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但**普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血清解凍后，也會(huì)存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質(zhì)量。若欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝**無(wú)菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾。我們不建議您以過(guò)濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞您的過(guò)濾膜。
 
4. 為什么要熱滅活血清?
加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué)研究，培養(yǎng)ES細(xì)胞，昆蟲(chóng)細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清。
 
5. 有必要做熱滅活嗎?
實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清，對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn)，或完全沒(méi)有任何作用，甚**通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清，沉淀物的形成會(huì)顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀(guān)察，像是“小黑點(diǎn)”，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會(huì)使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。#p#分頁(yè)標(biāo)題#e#
 
 6. 為什么儲(chǔ)存在冰箱中的胎牛血清會(huì)出現(xiàn)沉淀?
GIBICO的胎牛血清沒(méi)有預(yù)老化，儲(chǔ)存在2–8℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁。這應(yīng)該不會(huì)影響血清的質(zhì)量。推薦在–20℃儲(chǔ)存胎牛血清，避免反復(fù)凍融。
 
7. 如何避免沉淀物的產(chǎn)生?
解凍血清時(shí)，請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法(-20℃**4℃**室溫)，若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃**37℃)，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。解凍血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。請(qǐng)勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會(huì)變得混濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無(wú)須做此步驟。若必須做血清的熱滅活，請(qǐng)遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高，時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻，都會(huì)造成沉淀物的增多。
 
細(xì)胞分離試劑
1. 大部分連續(xù)細(xì)胞系，強(qiáng)貼壁細(xì)胞系，許多早代細(xì)胞
HBSS或無(wú)鈣鎂PBS
0.25％胰蛋白酶溶解在無(wú)鈣鎂平衡鹽溶液中
 
2. 細(xì)胞表面蛋白完整性重要的連續(xù)細(xì)胞系
HBSS或無(wú)鈣鎂PBS
0.05％胰蛋白酶溶解在0.53mM EDTA
 
3. 弱貼壁表皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化成纖維細(xì)胞（要求細(xì)胞表面完整性），原代細(xì)胞
HBSS或無(wú)鈣鎂PBS
EDTA,甘油 溶解在檸檬酸鈉中
 
4. 強(qiáng)貼壁早代細(xì)胞系
HBSS或無(wú)鈣鎂PBS
0.25％胰蛋白酶溶解在1mM EDTA，Dispase 0.6-2.4單位/ml 溶解在PBS
 
5. 上皮細(xì)胞
0.5mM -1mM EDTA
0.5mM -1mM EDTA，Dispase 0.6-2.4單位/ml 溶解在PBS
 
6. 強(qiáng)貼壁細(xì)胞，上皮細(xì)胞，一些腫瘤細(xì)胞
0.5mM -1mM EDTA
0.25％胰蛋白酶1mM EDTA，Dispase 0.6-2.4單位/ml 溶解在無(wú)鈣鎂PBS
 
7. 厚培養(yǎng)物，多層富含膠原的密集培養(yǎng)
1mM EDTA
0.25％胰蛋白酶，200單位/ml膠原酶，1mM EDTA溶解在無(wú)鈣鎂平衡鹽溶液中